描述

是从一名69岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离得到，为贴壁上皮样细胞。MCF-7保留了分化乳腺上皮的许多特征，包括：能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构（domes）；该细胞表达WNT7B癌基因；TNF-α可以抑制MCF-7细胞的生长；抗雌激素处理能调节细胞胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）的分泌。常用于乳腺癌生物学研究，乳腺癌抗癌药物筛选等方面研究。

MCF-7人乳腺癌细胞基本信息

培养条件

操作步骤

复苏：

1. 从液氮或-80℃冰箱中取出细胞，放入37℃水浴锅中，快速轻轻晃动，使冻存液迅速融化。解冻速度应快（大约2分钟）。为了减少污染的可能性，保持o形圈和封盖远离水。

   建议:复苏前10 min从液氮罐取出，放于-80℃，让管中液氮挥发，防止炸管。

2. 一旦将细胞解冻，就立即将冻存管从水浴中取出，并通过浸入或喷洒70%的乙醇来去污。从现在起所有的操作应在严格的无菌条件下进行。

3. 将细胞悬液转移到含有9.0 mL完全生长培养基的离心管中。并以大约125 x g旋转5到10分钟。

4. 弃出上清液，加入适当的新鲜生长培养基，轻柔吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀。并分配到适当数量的培养瓶中。在细胞的恢复过程中，避免培养基的过度碱度是很重要的。建议在添加小瓶内容物之前，将含有完全生长培养基的培养容器置入培养箱中至少15分钟，以使培养基达到其正常的pH值（7.0至7.6）。

5. 在合适的培养箱中培养至37℃。

传代：

细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1次。

b. 加入0.25%胰酶消化液，放置在37°℃的培养箱中，2分钟，即可轻松吹打下来 

c. 放入1.5ml锥型离心管中，800转每分钟，离心3分钟，目的是除去细胞碎片等其他杂质，使细胞更加干净

d. 将离心管中上清液吸出，只留下沉淀，再加入新鲜的完全培养基，吹打均匀后加入到细胞瓶中或者平皿中

e. 将细胞悬液按1:2-1:3比例，分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养

冻存：

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面250px皿为例;

1. 收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，加 1 mL新鲜培养基重悬细胞，进行细胞计数。

2. 根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度2×10^6-1×10^7/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液

3. 在冻存管上做好标识，包括细胞名称、细胞代数、冻存日期、操作者姓名

4. 根据冻存液种类和冻存设备选择对应冻存步骤。记录冻存管位置以便下次拿取。

• 若选用通用细胞冻存液或自配冻存液，细胞分装完后将冻存管放入梯度降温盒直接放置于-80℃冰箱中。

• 若不是用程序降温盒，则按照下列顺序依次降温：室温→4℃20min→-20℃30min→-80℃过夜，注意转移过程中要保冷，避免产生温差或冻存管融化。

• 若选用非程序细胞冻存液，可用非程序性冻存液重悬细胞后，直接将冻存管分散放入-80℃冰箱中。过夜后即可将细胞转移入液氮长期保存。

MCF-7生长特性

1、成团簇的生长

由于MCF-7细胞是三维团簇的方式生长，复苏和传代后会重新附着为三维岛（会有一些不会重新附着的簇）。生长最终会从岛屿状慢慢扩散开来，随着时间的推移，细胞会缓慢变成单层，这个时候细胞基本处于对数生长期。

2、生长缓慢

MCF-7人乳腺癌细胞是一种本身生长缓慢的细胞，传代培养时注意细胞密度。当细胞培养至细胞 70~80% 的汇合度，即可进行分瓶处理，一般T25培养瓶建议1:2传代，每周可传代2~3次，如果细胞生长速度比正常的时候更慢，可以适当提高血清浓度。

3、贴壁率低

MCF-7细胞在复苏、传代后，细胞会有一些漂浮状态，这些漂浮细胞是正常现象，可以视为混合的贴壁和悬浮细胞系。一般复苏、传代培养3天后漂浮细胞会再继续粘附贴壁，直到生长从岛屿扩散开来并且在培养瓶内伸展开，通常在进行换液的时候我们会补加培养基，如果一定要全换液，可以通过离心收集悬浮细胞可以通过离心收集悬浮细胞以1000转5min，并将悬浮细胞接种到新培养瓶中。

4、密度依耐性:

Mcf-7细胞密度低时，生长缓慢，接种密度建议启动接种密度:8.0x104至 1.5x105活细胞/cm 2为宜;继代培养的接种密度:4.0x104至1.0x105活细胞/cm2.

培养要点

1. 建议加入胰岛素

2. 使用高品质血清（Cat：C0501）

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