描述 

RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞），来源于雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤，是常用的炎症细胞模型之一

RAW 264.7（小鼠单核巨噬细胞白血病细胞）基本信息

培养条件

培养要点

1. RAW264.7细胞生长时喜欢结伴。正常生长状态应该是一小片一小片的生长，片片之间不连接，等到长到更多更密的时候会连成大片，并且会叠加成层。所以，要很好地控制好细胞的生长速度，不要等到叠加成层的时候再传代。

2. RAW 264.7细胞消化时不能用胰酶消化，消化会造成细胞分化，用细胞刮传代，这是一种非常经典的方法。也可以用另一种方法:吹打传代。

3. RAW 264.7细胞对血清要求高。血清质量差异会引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。选择品质好的血清更有利于RAW 264.7细胞生长。

4. 当细胞密度较大时，细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起，有些细胞甚至脱落漂浮。这些漂浮的细胞是存活的，在传代时应收集起来，离心后细胞沉淀可以继续培养。

5. 在正常培养条件下，未经诱导分化的RAW264.7 细胞形态上呈现松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形。培养时注意观察细胞形态，当发生细胞由圆形或椭圆形变为四角形，或伸出伪足等情况时，说明细胞状态改变，需及时传代，以免产生不可靠的实验数据。

操作步骤

复苏：

1. 在37℃的水浴中轻轻搅拌冻存管。为了减少污染的可能性，保持o形圈和封盖远离水。解冻速度应快（大约2分钟）。 

2. 一旦将细胞解冻，就立即将冻存管从水浴中取出，并通过浸入或喷洒70%的乙醇来去污。从现在起所有的操作应在严格的无菌条件下进行。 

3. 将细胞悬液转移到含有9.0 mL完全生长培养基的离心管中。并以大约125 x g旋转5到10分钟。 

4. 弃出上清液，加入适当的新鲜生长培养基后吹匀，并分配到适当数量的培养瓶中。在细胞的恢复过程中，避免培养基的过度碱度是很重要的。建议，在添加小瓶内容物之前，将含有完全生长培养基的培养容器置入培养箱中至少15分钟，以使培养基达到其正常的pH值（7.0至7.6）。pH（7.0至7.6）。 

5. 在合适的培养箱中培养至37℃。

传代：

RAW 264.7细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1次。          

2. 加2 mL预冷的PBS溶液于培养瓶中，使PBS溶液浸润所有细胞，然后轻轻吹下细胞，将吹下来的细胞及细胞悬液收集到无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。          

3. 将RAW 264.7巨噬细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

冻存：

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面10cm皿为例;

1.收集RAW 264.7细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，加 1 mL新鲜培养基重悬细胞，进行细胞计数。

2.根据RAW 264.7细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×10^6-1×10^7/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

常见问题及解决方法

1、RAW 264.7细胞的培养环境恶劣或吞噬过多抗原后会促使该细胞呈现梭形、长梭形，形态发生变化

处理办法：

改善细胞培养环境，例如与细胞接触的器皿保证无菌，使用质量较高的胎牛血清。

2、RAW 264.7细胞生长速度缓慢原因

处理办法：

定期传代，控制好传代比例，汇合度不可过低。及时进行支原体检测，如发现污染，即刻使用支原体去除试剂进行清除。

3、RAW 264.7细胞如何避免细胞分化

a. RAW 264.7细胞培养过程中密度过大，培养基颜色发黄都易刺激细胞分化，分化的RA264.7细胞呈多角形，体积明显增大，时常有较长的黑色触角。

b. RAW 264.7细胞消化时不能用胰酶消化，消化会造成细胞分化，用细胞刮传代或吹打传代。吹打的力度一定要轻，切勿暴力吹打

c. RAW 264.7细胞三天不传代更容易分化，很难吹下，每一次接种密度都要控制好

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