描述

THP-1细胞从一名1岁的患有急性单核细胞性白血病的男孩的外周血中分离建立，有分化为多种巨噬细胞的能力，该细胞系可用于免疫系统紊乱的研究， 免疫学研究和毒理学研究

THP-1（人单核细胞白血病细胞）基本信息

培养条件

生长特性

THP-1细胞喜欢酸性环境：

在偏酸性环境中，THP-1生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是适合细胞生长的，此时补液或半换液即可

THP-1细胞有密度依赖性：

THP-1细胞密度低时，生长较慢，培养密度维持在50万-100万细胞/毫升为宜；超过200万/毫升则需要传代。

THP-1细胞对血清要求高：

血清质量差异可能引起细胞状态变化，建议选用高质量的胎牛血清。选择品质好的血清更有利于THP-1细胞生长

操作步骤

复苏：

1.在37℃的水浴中轻轻搅拌冻存管。为了减少污染的可能性，保持o形圈和封盖远离水。解冻速度应快（大约2分钟）。 

2.一旦将细胞解冻，就立即将冻存管从水浴中取出，并通过浸入或喷洒70%的乙醇来去污。从现在起所有的操作应在严格的无菌条件下进行。 

3.将小瓶内容物转移到含有9.0 mL完全生长培养基的离心管中。并以大约125 x g旋转5到7分钟。 

4.用推荐的完全生长培养基重悬浮细胞颗粒，并分配到适当数量的培养瓶中。在细胞的恢复过程中，避免培养基的过度碱度是很重要的。建议，在添加小瓶内容物之前，将含有完全生长培养基的培养容器置入培养箱中至少15分钟，以使培养基达到其正常的pH值（7.0至7.6）。pH（7.0至7.6）。 

5.在合适的培养箱中培养至37℃。

传代：

如果THP-1细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

方法一：

收集THP-1细胞，1000RPM条件下离心3-5min分钟，弃去上清液补加1-2ml培养液后吹匀，将THP-1细胞悬液按1:2的比例分到新的含10ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：

可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起将THP-1细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

备注：第一次传代时，若培养基中有细胞碎片，则将细胞悬液装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀，按1:1分到新的装有10mL新鲜培养基的培养皿中，置于培养箱中培养。

冻存：

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面10cm皿为例;

1.收集THP-1细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，加 1 mL新鲜培养基重悬细胞，进行细胞计数。

2.根据THP-1细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×10^6-1×10^7/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

常见问题及解决方法

1.THP-1细胞冻存过后复苏困难怎么办？

1. THP-1细胞对细胞密度具有高度依赖性。冻存时，密度一般为5×10^6-10^7/ml较为适宜；同时复苏密度也有依赖性，建议不低于3×10^6/ml。当细胞传过几次代，状态较好时，传代密度维持在5×10^5/ml-10^6/ml较为合适，超过2×10^6/ml可进行传代。

2. 培养过程中如果存在细胞碎片，可等待细胞长起来后，通过低速离心去除。THP1细胞离心速度一般不要高于800rpm，实验室常用600-700rpm，否则可能会导致细胞死亡

3. 当细胞密度高时，聚团细胞比例高于30%时，聚团严重。细胞间界线不清晰，细胞团模糊且较大等现象，则这种细胞聚团是异常的。此时，若对细胞没有做过任何外界刺激或实验处理，可检查培养条件，一般更换优质血清或提高血清用量看是否有助于解决聚团问题。

4. THP-1细胞在传代后可能会出现贴壁现象，如轻微贴壁可以轻 吹收集细胞或者丢弃贴壁的细胞，贴壁较多时，可检查培养条件是否合适。

2.THP-1细胞培养过程中细胞发生贴壁怎么处理?

THP-1细胞培养过程中出现少量细胞贴壁属于正常情况，不需要担心。可以轻吹收集细胞或者丢弃贴壁部分细胞。

处理方法：

只需将THP-1细胞悬液转移至新瓶中即可。但如果当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，这时候就需要排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。

3.THP-1细胞培养过程中细胞发生聚团怎么办？

THP-1细胞培养过程中出现少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是THP-1细胞密度较低时，易出现这种情况。

处理方法：

可以更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，会自己分散开。

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