1. 常规方法收集对数期的贴壁细胞或悬浮细胞于试管中。
2. 根据培养细胞的密度和冻存管的大小确定所需冻存细胞数。
3. 将所需数目的细胞悬浮液置于离心管中,1000rpm,离心5分钟,吸弃离心管中的上清液。
4. 加入适量的细胞冻存液于离心管中,使细胞浓度约为5×105~1×107/ml。轻柔地混匀细胞,制成细胞混合液。
5. 将离心管中的细胞混合液分装于已标记的冻存管中,建议每管1 ml或1.5 ml。
6. 直接将分装好的细胞冻存管放入-80℃超低温冰箱中,可长期冷冻保存。
7. 如果想液氮中长期保存,需先放入-80℃冰箱至少一天时间,方可移至液氮罐中保存。