1. 取新鲜组织 100mg 左右加至无菌离心管中, 用眼科剪将组织彻底剪碎至 1-2mm3 ,加入组织消化液1 mL。
2. 将离心管置于恒温摇床上,37℃、180rpm 震荡孵育 10-30min 消化组织,可根据组织的不同适当缩短或延 长消化时间。
3. 孵育结束后将离心管内的组织匀浆用 70µm 无菌过滤器过滤,然后加入细胞培养基冲洗过滤器,用离心管收 集滤液。
4. 将细胞悬液 1200rpm 离心 5min,弃上清。
5. 再加入适量培养基,1200rpm 离心 5min,弃上清。
6. 用细胞培养基重悬细胞,取少量细胞镜下观察消化情况。
7. 根据需要将细胞用于后续实验。